นโยบายการจัดการความรู้ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์ 1.ให้ใช้เครื่องมือการจัดการความรู้ผลักดัน คุณภาพคน และกระบวนทำงาน 2.ส่งเสริมการแลกเปลี่ยนประสบการณ์การทำงาน จากหน้างาน 3.ส่งเสริมให้มีเวทีเรียนรู้ร่วมกัน

DaDa
Ico64
Songsuda Promthong
นักวิทยาศาสตร์
ศูนย์เครื่องมือวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์
เครือข่าย
สมาชิก · ติดตาม: 0 · ผู้ติดตาม: 5

อ่าน: 10664
ความเห็น: 1

ปัญหาของ HPLC และวิธีการแก้ปัญหาเบื้องต้น สำหรับผู้ใช้งาน...ตอน Pressure สูง

ปัญหา Pressure สูง ของ HPLC แก้ไขได้หากรู้ ที่มา และ สาเหตุ (ประสบการณ์จริงจากการทำงาน)

HPLC : Agilent 1100

ศูนย์เครื่องมือวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร

ปัญหา Pressure สูง  ของ HPLC แก้ไขได้หากรู้ ที่มา

และ สาเหตุ (ประสบการณ์จริงจากการทำงาน)

Pressure สูง  : เนื่องจากการอุดตัน สกปรก จากอนุภาคที่ไม่สะอาด ทั้ง ตัวอย่าง และ mobile phase


จุดเกิดเหตุ


1.1 Purge valve :
เป็น valve ควบคุมการไหลของ mobile phase ว่าจะให้ไหลลง waste หรือ ไหลเข้าระบบ HPLC  ที่ Purge valve จะมี frit ที่ ทำหน้าที่ในการ ดักจับ กรอง สิ่งสกปรก อนุภาคเล็กๆที่ไม่สะอาดจาก mobile phase กรณีที่ ควบคุมการไหลของ mobile phase ให้ไหลลง waste แล้วพบว่า Pressure สูง นั่นหมายความว่า  frit ที่ Purge valve สกปรก
 แก้ไข - โดยการเปลี่ยน frit ใหม่


 

1.2 Needle seat : Needle คือ เข็ม seat คือ ที่รองรับ รวมกันคือ ที่รองรับเข็ม หรือ ที่วางเข็ม นั่นเอง กลไกการทำงาน เมื่อสารถูกดึงด้วยเข็ม เข็มจะฉีดสารที่ถูกดึงเข้าสู่ column โดยการปักลงไปที่ Needle seat เมื่อเข็มปักลงที่ Needle seat แล้ว pressure สูงขึ้นทันทีทันใด นั่นหมายความว่า Needle seat ตันจึงทำให้ Pressure สูง


แก้ไข  –   ถอด Needle seat ออกมา แล้วต่อ ที่ Purge valve และ flush ด้วยน้ำหรือ mobile phase อัตราการไหล
ประมาณ 3-5 ml/min เพื่อผลักดันให้สิ่งที่อุดตัน ให้หลุดออกไป


               - หรือ เปลี่ยน Needle seat ใหม่

 

1.3 Guard column : guard คือป้องกัน guard column คือ ทำหน้าที่ป้องกันคอลัมน์ ดักจับ กรอง อนุภาคที่สกปรก ก่อนสาร และ mobile phase เข้าสู่ column จะมีอายุการใช้งาน ใช้แล้วทิ้งเลย หากตรวจเช็คดูแล้วว่าน่าจะเป็นส่วนนี้ตัน
แก้ไข – เปลี่ยน Guard column ใหม่

1.4 Column : เป็นส่วนสำคัญในการแยกสารด้วย HPLC อาจทำให้เกิด การอุดตัน และPressure สูงได้เนื่องจากหลาย

สาเหตุ    -   ตัวอย่างไม่สะอาด หรือ mobie phase ไม่สะอาด ถูกฉีดเข้าสู่ column


แก้ไข     -   กรองตัวอย่าง และ Mobile phase ทุกครั้ง และ mobile phase ที่ใช้ต้องเป็นชนิด HPLC เกรด เท่านั้น


สาเหตุ    -  หรือใช้ปริมาณสารมากเกิน Capacity ของ column จะรับได้


แก้ไข      -  ใช้ปริมาตรตัวอย่างที่เหมาะสมกับ Column (ไม่มากจนเกินไป)


สาเหตุ    -  หรือ จากการใช้งานที่มี กรด /เบส/บัฟเฟอร์ แล้วไม่มีการล้าง Column เพื่อ กำจัดสารที่ตกค้างออกไป


แก้ไข     -  ล้าง Coulmn ด้วยน้ำหลังจากใช้งานที่มี mobile phase กรด /เบส/บัฟเฟอร์ ทุกครั้ง ด้วยอัตราการไหลประมาณ 0.5 ml/min


สาเหตุ   -  หรือ ใช้สภาวะที่ไม่เหมาะสมในการแยกสารแล้วสารเกิดตกค้างใน Column   
     แก้ไข    - ล้าง Coulmn ด้วย mobile phase ที่เหมาะสมที่สามารถ flow เข้า column ได้ ตามคู่มือของ Coulmn
   

หาก Pressure ยังคงสูงอยู่   - อาจจะต้องเปลี่ยน sieve และ glass fibre filter ที่ column

 

-  หรือทำ back pressure column โดยการกลับทิศทางการ flow ของ column  
   (ทางเลือกสุดท้าย)


- เปลี่ยน Column ใหม่ เนื่องจากอายุการใช้งาน

............................................................................

ทั้งหมดนี้นักวิทยาศาสตร์ หรือ ผู้ดูแลเครื่อง HPLC สามารถ ปฏิบัติได้เอง ไม่ต้องถึงมือวิศวกร .... นักวิทย์ฯ ตัวเล็กๆ อย่างเราก็ทำได้.....

 

 

หมวดหมู่บันทึก: บริการวิชาการ
สัญญาอนุญาต: สงวนสิทธิ์ทุกประการ Copyright
สร้าง: 28 พฤศจิกายน 2550 15:08 แก้ไข: 28 กุมภาพันธ์ 2551 11:04 [ แจ้งไม่เหมาะสม ]
ดอกไม้
สมาชิกที่ให้กำลังใจ
 
Facebook
Twitter
Google

บันทึกอื่นๆ

ความเห็น

Ico48
noo [IP: 158.108.106.227]
28 กรกฎาคม 2553 10:25
#59117
-ขอบคุณมากค่ะ  ช่วยได้มากเลย

ร่วมแสดงความเห็นในหน้านี้

ชื่อ:
อีเมล:
IP แอดเดรส: 3.235.105.97
ข้อความ:  
เรียกเครื่องมือจัดการข้อความ
   
ยกเลิก หรือ