นโยบายการจัดการความรู้ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์ 1.ให้ใช้เครื่องมือการจัดการความรู้ผลักดัน คุณภาพคน และกระบวนทำงาน 2.ส่งเสริมการแลกเปลี่ยนประสบการณ์การทำงาน จากหน้างาน 3.ส่งเสริมให้มีเวทีเรียนรู้ร่วมกัน

DaDa
Ico64
Songsuda Promthong
นักวิทยาศาสตร์
ศูนย์เครื่องมือวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์
เครือข่าย
สมาชิก · ติดตาม: 0 · ผู้ติดตาม: 5

อ่าน: 8133
ความเห็น: 2

Gradient elution

การเปลี่ยนแปลงอัตราส่วน mobile phase (ตัวทำละลายเคลื่อนที่) ขณะทำการวิเคราะห์

 

 

 

จากที่ได้กล่าวไปในบันทึก Isocratic elution  

ว่า การจำแนกเทคนิคลิควิดโครมาโทกราฟีสามารถแบ่งประเภท (classification) ได้หลายแบบ ขึ้นกับจะใช้อะไรมาเป็นเกณฑ์ และการจำแนกประเภทตาม การเคลื่อนที่ของสารผ่านเฟสคงที่ (sample development or movement) เป็นที่นิยมใช้กันมากและมีหลายแบบและแบบ Elution Chromatography การให้สารผ่านเฟสเคลื่อนที่แบบ Elution เป็นรูปแบบที่นำมาใช้ประโยชน์มากที่สุด ซึ่งนอกจาก Isocratic elution ที่ได้กล่าวไปแล้วยังมี Elution Chromatography อีก 1 รูปแบบ คือ Gradient elution

 

 

Gradient elution

เป็นการเปลี่ยนแปลงอัตราส่วน mobile phase (ตัวทำละลายเคลื่อนที่) ขณะทำการวิเคราะห์ ซึ่งต้องใช้ตัวทำละลายร่วมกันอย่างน้อย 2 ชนิด (มากกว่า 2 ก็ได้) และจะต้องเลืออกตัวทำละลายที่เข้ากันได้ทุกสัดส่วน เหมาะกับตัวอย่างที่มีหลายสารประกอบในตัวอย่างที่ต้องการแยก

ยกตัวอย่างเช่น

 

รูปที่ 1

 

 

จากข้อมูลรูปที่ 1 เป็นการแยกแบบ gradient elution มี mobile phase 2 ชนิดดังนี้

Mobile phase A:.   n-butanol / water / trifluoroacetic acid  สัดส่วน (1/98.9/0.1 (v/v/v))  และ

Mobile phase B:.  n-butanol / acetonitrile / trifluoroacetic acid  สัดส่วน (1/98.9/0.1 (v/v/v))  

ขั้นตอนการตั้ง program gradient ดังนี้

 

หากอัตราส่วนตัวทำละลายเคลื่อนที่เริ่มต้นแตกต่างจากอัตราส่วนสุดท้ายมาก เมื่อจบการวิเคราะห์แล้วต้องการเริ่มต้นวิเคราะห์ต่อไปด้วยสภาวะเดียวกันควรปรับอัตราส่วนตัวทำละลายเคลื่อนที่เป็นค่ากลางก่อนเข้าสู่สภาวะเดิม

ดังนั้น

จากตัวอย่างข้างต้น (รูปที่ 1 ) อัตราส่วนเริ่มต้นระหว่าง Mobile phase A : Mobile phase B เป็น  0% : 100% และจบการทำงานที่ Mobile phase A : Mobile phase B เป็น  100% : 0% เมื่อต้องการกลับมาที่สภาวะเริ่มต้นควรจะปรับอัตราส่วน Mobile phase A : Mobile phase B เป็น  50% : 50% และ 0% : 100%  ตามลำดับเพื่อยืดอายุการใช้งานของคอลัมน์ ดังนั้น ควรจะตั้ง program gradient (จากรูปที่ 1) เมื่อต้องการวิเคราะห์เป็นดังนี้

 

หมวดหมู่บันทึก: บริการวิชาการ
สัญญาอนุญาต: ซีซี: แสดงที่มา-ไม่ใช้เพื่อการค้า-อนุญาตแบบเดียวกัน Cc-by-nc-sa
สร้าง: 07 มีนาคม 2555 08:41 แก้ไข: 07 มีนาคม 2555 08:44 [ แจ้งไม่เหมาะสม ]
ดอกไม้
สมาชิกที่ให้กำลังใจ: Ico24 ServiceMan, Ico24 คนธรรมดา, และ Ico24 หัวกรวด.
สมาชิกที่ให้กำลังใจ
 
Facebook
Twitter
Google

บันทึกอื่นๆ

ความเห็น

Ico48
sarita [IP: 202.12.97.100]
16 ตุลาคม 2556 15:26
#93684

รบกวนถามหน่อยค่าา อยากจะ run gradient เพื่อแยกสาร 2 ตัวที่มีโครงสร้างต่างกันเพียงแค่พันธะเดี่ยวและคู่ตำแหน่งเดียวเลยค่ะ ซึ่งเคย run isocratic 70%ACN มาแล้ว และ retention time ต่างกันนี้ดดดดดเดียวเองค่ะ สามารถไหมคะ :)) รบกวนด้วยนะคะ มาแอบอ่านความรู้บ่อยๆค่ะ แต่พอมาทำจริงดันไม่ออก ==" ขอบคุณล่วงหน้านะคะ

ร่วมแสดงความเห็นในหน้านี้

ชื่อ:
อีเมล:
IP แอดเดรส: 18.205.96.39
ข้อความ:  
เรียกเครื่องมือจัดการข้อความ
   
ยกเลิก หรือ