นโยบายการจัดการความรู้ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์ 1.ให้ใช้เครื่องมือการจัดการความรู้ผลักดัน คุณภาพคน และกระบวนทำงาน 2.ส่งเสริมการแลกเปลี่ยนประสบการณ์การทำงาน จากหน้างาน 3.ส่งเสริมให้มีเวทีเรียนรู้ร่วมกัน

DaDa
Ico64
Songsuda Promthong
นักวิทยาศาสตร์
ศูนย์เครื่องมือวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์
เครือข่าย
สมาชิก · ติดตาม: 0 · ผู้ติดตาม: 5

อ่าน: 10555
ความเห็น: 2

external standard เป็นอย่างไร ?

external standard เป็นอย่างไร ?

มีผู้สนใจสอบถามทาง webboard ของศูนย์เครื่องมือวิทยาศาสตร์ว่า
การวิเคราะห์ด้วย HPLC ที่ใช้สารมาตรฐานเทียบแบบ external standard เป็นอย่างไร ?

การทดสอบด้วย HPLC นอกจากต้องการแยกสารแล้ว ก็ต้องการทราบว่าสารที่ถูกแยกออกเป็นสารอะไรและมีปริมาณเป็นเท่าไหร่ หรือ ต้องการทราบว่ามีสารที่เราสนใจหรือไม่และมีปริมาณเท่าไหร่ ดังนั้นในการทดสอบด้วยวิธีนี้หากต้องการทราบปริมาณ มีวิธีการหาปริมาณด้วย HPLC หลายวิธีด้วยกันแต่ หนึ่งในการหาปริมาณที่นิยมกันมากที่สุดคือ แบบ External Standard

ซึ่งสารที่ต้องการหาปริมาณแบบ External Standard จะต้องมีคุณสมบัติดังนี้
2.1.ปริมาตรสารมาตรฐานและสารตัวอย่างที่ฉีดในแต่ละครั้งต้องเท่ากันและต้องถูกต้อง    แม่นยำ
2.2. retention time ของสารแต่ละตัวต้องมีค่าคงที่
2.3. การทำงานของคอลัมน์และ detector ต้องคงที่ตลอดเวลา
2.4.การextrapolateพื้นที่ใต้กราฟของสารตัวอย่างต้องใช้ calibration curve ช่วงที่เป็นเส้นตรง


ยกตัวอย่างวิธีการหาปริมาณแบบ External Standard


1.    หา condition ที่เหมะสมในการแยก สาร A

 



2. เตรียมสารมาตรฐาน (สาร A)  5 ความเข้มข้น เช่น

Vial ที่ 1   - มี สารมาตรฐาน A เข้มข้น 1 mg/l
Vail ที่ 2   - มี สารมาตรฐาน A เข้มข้น 5 mg/l
Vail ที่ 3   - มี สารมาตรฐาน A เข้มข้น 10 mg/l
Vail ที่ 4   - มี สารมาตรฐาน A เข้มข้น 50 mg/l
Vail ที่ 5   - มี สารมาตรฐาน A เข้มข้น 100 mg/l
 

3. ฉีดสารมาตรฐาน A ทั้ง 5 ความเข้มข้นและ วัดpeak area ของสารมาตรฐาน ทั้ง 5 ความเข้มข้น

                



 

4. เมื่อฉีดทั้ง 5 ความเข้มข้น แล้วได้โครมาโทแกรม ส่วนของ peak นำArea สารมาตรฐาน A ไป plot เป็น calibration curve (กรณีฉัชีดสารมาตรฐานแต่ละความเข้มข้นมากกว่า1ซ้ำ ให้ใช้ค่าเฉลี่ยของ area ที่ได้นำไป plot เป็น calibration curve) จะได้ กราฟเชิงเส้น และสมการเส้นตรง ดังรูป

 



5. ฉีดสารตัวอย่างและวัด Peak area ของสาร สารตัวอย่าง

 



6. จากนั้น Integrate โครมาโทแกรมของสารตัวอย่าง เพื่อนำค่า area มาคำนวณ แทนค่าลงสมการเส้นตรง ก็จะได้ปริมาณสารตัวอย่างที่ต้องการ
ยกตัวอย่าง จาก สมการเส้นตรง Y = 10.083X
Y = Area
 X = Amount (ปริมาณสารที่ต้องการทราบ)
      10.083 =  slope
 
ยกตัวอย่าง Area สาร A ของตัวอย่าง = 403.4
แทนค่าในสมการเส้นตรง จะได้ ปริมาณสาร A คือ  40 mg/l   (Y = 403.4,  403.4 = 10.083X )

 

 

ขอนำมาแชร์อีกช่องทางนึงค่ะ

 

หมวดหมู่บันทึก: บริการวิชาการ
สัญญาอนุญาต: ซีซี: แสดงที่มา-ไม่ใช้เพื่อการค้า-อนุญาตแบบเดียวกัน Cc-by-nc-sa
สร้าง: 23 มีนาคม 2555 16:35 แก้ไข: 23 มีนาคม 2555 16:35 [ แจ้งไม่เหมาะสม ]
ดอกไม้
สมาชิกที่ให้กำลังใจ: Ico24 Kathi Noodee, Ico24 MoN_Takan, และ 3 คนอื่น.
สมาชิกที่ให้กำลังใจ
 
Facebook
Twitter
Google

บันทึกอื่นๆ

ความเห็น

อยากเห็น Calibration curve ที่ได้ R-Squre = 1.000 :)

ไม่เชื่ีออย่าลบลู่ ไปขอดูได้ที่ HPLC ห้อง G01 และ GC โดย กะทิหนูดี...555555 (เทพ มาก)

ร่วมแสดงความเห็นในหน้านี้

ชื่อ:
อีเมล:
IP แอดเดรส: 35.173.234.140
ข้อความ:  
เรียกเครื่องมือจัดการข้อความ
   
ยกเลิก หรือ