นโยบายการจัดการความรู้ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์ 1.ให้ใช้เครื่องมือการจัดการความรู้ผลักดัน คุณภาพคน และกระบวนทำงาน 2.ส่งเสริมการแลกเปลี่ยนประสบการณ์การทำงาน จากหน้างาน 3.ส่งเสริมให้มีเวทีเรียนรู้ร่วมกัน

DaDa
Ico64
Songsuda Promthong
นักวิทยาศาสตร์
ศูนย์เครื่องมือวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์
เครือข่าย
สมาชิก · ติดตาม: 0 · ผู้ติดตาม: 5

อ่าน: 2433
ความเห็น: 4

บันทึกหน้างาน - Size and Strength

sample size และ Mobile phase composition

 

เรื่องเล่าหน้างาน

เรื่องของเรื่องมีอยู่ว่า  มีนักศึกษาใช้เครื่องมือ HPLC ด้วยตนเอง วิเคราะห์สารโดยเลือกใช้ตัวตรวจวัด (detector) ชนิด RID (refractive index detector) เริ่มต้นคล้ายกับบันทึก Big and low cause Unbalance แต่ปัญหาที่เกิดขึ้นต่างประเด็นกันค่ะ
วันแรกที่นักศึกษามาใช้เครื่องด้วย detector ชนิด RID แต่ไม่ใช่การใช้เครื่อง HPLC ครั้งแรก นักศึกษามีประสบการณ์การใช้เครื่องแต่ด้วย Detector อื่น มาก่อนแล้ว และวันนั้นลูกค้าใช้เพื่อแยกสารประกอบ 3 ชนิดที่ผสมอยู่ในตัวอย่าง โดยใช้สภาวะการแยกตามเอกสาร ประมาณวันที่ 3 ของการใช้เครื่อง นักศึกษาจึงขอพบ DaDa เพื่อขอคำแนะนำ พบว่า จากการใช้เครื่อง 3 วันที่ผ่านมานลูกค้าไม่ได้ข้อมูลการแยกของสารเลย จากการดูผล ข้อมูลโครมาโตแกรมที่ได้ มีแค่ peak เดียว (ดังรูปที่ 1) ลูกค้าบอกว่ามันไม่แยกจากกันทำอย่างไร ลูกค้าพยายามปรับสัดส่วนตัวทำละลายเคลื่อนที่ (mobile phase ) แล้วก็ไม่แยกพี่ ดาดา พอจะมีคำแนะนำบ้างไหม
อืม.............................


จากการดูข้อมูลของลูกค้า ดาดา จึงถามข้อมูลเพิ่มเติมว่า
1.    ใช้สารความเข้มข้นเท่าไหร่ ?
2.    สัดส่วนตัวทำลายตัวทำละลายเป็นอย่างไร?
หลังจากได้คำตอบ ดาดา เลยแนะนำ 2 แนวทางดังนี้
1.    ให้เพิ่มความเข้มข้นของสารมาตรฐานทั้ง 3 ชนิด เนื่องจากความเข้มที่น้องใช้นั้นน้อยเกินไป น้อยกว่า LOD และ LOQ ที่เครื่องจะวัดได้
2.    ให้ปรับความแรง (strength) ของ mobile phase ลง เพื่อลดความแรงของตัวทำละลายเคลื่อนที่เนื่องจากมีความแรงมากเกินไปทำให้สารไม่แยกออกจากกัน (ผลคือให้ค่า capacity และ selectivityไม่ดี)


        โดยวิธีแรกที่แนะนำ DaDa คิดว่าเป็นทางออกที่ดีที่สุด ในตอนแรกนักศึกษาก็ค้านว่าความเข้มเท่านี้ก็เพียงพอแล้ว ดาดา เลยบอกว่า จากประสบการณ์การวิเคราะห์สารประเภทเดียวกันนี้หากต้องการใช้ RID ในการตรวจวัดจะต้องใช้สารที่มีความเข้มข้นค่อนข้างสูงเนื่องจาก LOD ของการวิเคราะห์สารนี้สูงมาก
    จากรูปที่ 1  นักศึกษาคิดว่าสารทั้ง 3 ชนิดไม่แยกจากกัน โดยเข้าใจว่า พีคเดียวนั้นคือ สาร 3 ชนิดที่ไม่แยก
ดาดา ก็บอกว่าพีคที่เห็นนั้นเป็นพีคของตัวทำละลายหรือT 0 (แต่นักศึกษายังคงคิดว่าคือสารที่สนใจ  ดังนั้นนักศึกษาจึงเลือกวิธีที่ 2 นั่นคือปรับความแรง (strength) ของ mobile phase จากที่ใช้ 90:10 (Acetonitrile:Water) ค่อยๆปรับ 85:15 , 80:20 , 75:25 ……. โดยคงที่อัตราการไหล1.5 ml/min
พบว่ายังคงให้ข้อมูลไม่ต่างจากเดิม ดังรูปที่ 1


 
รูปที่ 1

หลังจากนั้น ดาดา ได้รับ โทรศัพท์จาก อาจารย์ที่ปรึกษาของนักศึกษา ขอช่วยดูและแก้ปัญหาให้นักศึกษาด้วย    ดาดา บอกว่า ยินดี และได้คุยกับนักศึกษา และได้ให้เพิ่มความเข้มข้นของสารขึ้นตามการแนะนำครั้งแรก วันถัดมานักศึกษามาใช้เครื่องและทำตามคำแนะนำของ DaDa โดยเพิ่มความเข้มข้นของสารมาตรฐานพบว่า


1.    เห็นพีคของสารทั้ง 3 ชนิดแยกออกมาในเวลาที่แตกต่างกันแต่ยังไม่ชัดเจนมากนักเนื่องจากความเข้มข้นยังน้อยและลักษณะพีค broad กว้างไม่ shape  ระยะเวลา และ resolution (การแยก) ไม่ดีเท่าที่ควร


 
รูปที่ 2


2.    ต่อมาจึงให้เพิ่มความเข้มอีกนิดรวมทั้ง ปรับความแรงของ mobile phase ลดลง ด้วย ในที่สุดก็ได้สภาวะที่เหมาะสมและสามารถตรวจวัดสัญญาณอย่างชัดเจนดังรูปที่ 3
 


รูปที่ 3

จากปัญหาของนักศึกษาครั้งนี้ เป็นผลจากส่วนหนึ่งในพารามิเตอร์ที่มีผลต่อการแยกด้วย HPLC นั่นคือ
1.    sample size คือปริมาตร และหรือ ความเข้มข้นจองของตัวอย่าง ในการวิเคราะห์ คือ น้อยเกินไปทำให้ไม่สามารถตรวจวัดเจอสารที่ต้องการได้แค่เพิ่มความเข้มข้นขึ้นอีกนิดก็แก้ปัญหาได้
2.    Mobile phase composition  คือ สัดส่วนความแรงของ ตัวทำละลายไม่เหมาะสมทำให้ได้ผลกังดังรูปที่ 2 เมื่อปรับสัดส่วนความแรงของ ตัวทำละลายให้เหมาะสมทำให้ได้ข้อมูลที่ดีดังรูปที่ 3

หมวดหมู่บันทึก: พัฒนางานประจำ
สัญญาอนุญาต: ซีซี: แสดงที่มา-ไม่ใช้เพื่อการค้า-อนุญาตแบบเดียวกัน Cc-by-nc-sa
สร้าง: 09 เมษายน 2555 08:29 แก้ไข: 10 เมษายน 2555 15:17 [ แจ้งไม่เหมาะสม ]
ดอกไม้
สมาชิกที่ให้กำลังใจ: Ico24 MoN_Takan, Ico24 Our Shangri-La, และ 4 คนอื่น.
สมาชิกที่ให้กำลังใจ
 
Facebook
Twitter
Google

บันทึกอื่นๆ

ความเห็น

เป็นบันทึกที่น่าจะมีประโยชน์กับผู้ที่ต้องใช้เครื่องนี้ในอนาคตมากเลยนะคะ ดีจังเลย นี่แหละผู้มีประสบการณ์ เพราะแนะนำการแก้ไขได้ถูกจุดตั้งแต่แรกเห็นปัญหาแล้ว เยี่ยมๆค่ะ พี่โอ๋ขอแนะนำให้เพิ่มคำสำคัญอีก สองสามคำนะคะ เพื่อจะได้มีประโยชน์มากขึ้นกับคนที่อาจมีปัญหา จะได้พบคำตอบที่นี่ค่ะ 

HPLC, RID, refractive index detector, ปัญหาการใช้เครื่องHPLC

 

ความเห็นนี้ แก้ไขแล้วลบทิ้งได้เลยนะคะ 

ในข้อ 2 ของสองบรรทัดสุดท้ายมีคำที่พิมพ์ผิด น่าจะเพราะพิมพ์เร็วไปอยู่นะคะ ตัวทำละลาย กลายเป็นตัวทำลายไปเสียแล้ว กับ"ดัง"รูปที่ 2 กลายเป็น"กัง"ไปค่ะ

ขอบคุณพี่ โอ๋-อโณสำหรับคำแนะนำ และการติดตามค่ะ

มีที่ผิดอีกนิดในบรรทัดที่สี่นับจากล่าง น่าจะเป็น"ความเข้มข้น ของ ตัวอย่าง

ร่วมแสดงความเห็นในหน้านี้

ชื่อ:
อีเมล:
IP แอดเดรส: 3.92.92.168
ข้อความ:  
เรียกเครื่องมือจัดการข้อความ
   
ยกเลิก หรือ