ทำไมถึงเลือกใช้ Reverse phaseC-18 ในการวิเคราะห์

มีคำถามสอบถามผ่านทาง web board ของศูนย์เครื่องมือฯ ถามมาว่า

ทำไมถึงเลือกใช้ Reverse phase C-18 ในการวิเคราะห์

ข้อมูลเกี่ยวกับ Reversed phase    และ  normal phase  อ่าน ที่นี่

คำตอบพอจะอธิบายได้มีอยู่ว่า...

เนื่องจาก Reverse phaseจะใช้

เฟสคงที่ (stationary phase) สภาพไม่มีขั้ว / ขั้วน้อยกว่า Mobile phase เช่น octadecylsilane (C-18) เป็นต้น

และ เฟสเคลื่อนที่ (mobile phase) มักเป็นสารมีขั้ว เช่น น้ำ , methanol, acetonitrile  เป็นต้น

หลักในการแยกสารด้วย HPLC อย่างนึงคือ คือ like dissolve like สารมีขั้วมัก ถูก/ชอบ กับสารมีขั้วด้วยกัน

จากลักษณะโครงสร้าง caffeine เป็นโมเลกุลมีขั้ว  เหมาะที่จะแยก โดยใช้ Mobile phase ที่มีขั้ว เช่นกัน

 ทำให้แยกสารออกมาได้ก่อน และ เร็ว

 

 

ที่มาของรูป http://www.foodnetworksolution.com/vocab/wordcap/caffeine

 

ดังนั้นจึงควรเลือกใช้เฟสคงที่ (Stationary phase) สภาพไม่มีขั้ว /ขั้วน้อยกว่า Mobile phase

เช่น  คอลัมน์ชนิด C-18 , C-16 หรือ C-8 ขึ้นกับ Method นั้นๆ

 

อีกทั้ง Mobile phase ที่ใช้ในระบบ Reverse phase ราคาค่อนข้างถูกกว่า

 Mobile phaseในระบบ Normal phase อีกด้วย

 

หากเลือกใช้คอลัมน์ ที่มีขั้ว  (เช่น Silica) มากกว่า Mobile phase (เช่น Hexane เป็นต้น)

caffeine ที่มีความเป็นขั้วถูกหน่วงในคอลัมน์ (เพราะคอลัมน์มีขั้วเช่นกัน)

 

ทำให้ใช้เวลาค่อนข้างนานในการแยกหรืออาจจะไม่แยกออกมาจากคอลัมน์เลยก็เป็นได้

ดังนั้น Method โดยส่วนใหญ่จึง นิยมเลือกใช้ เทคนิค Reversed phase ในการวิเคราะห์ caffeine