2D-gel electrophoresis

จริงๆ แล้ว 2D-gel electrophoresis เป็นชุดเครื่องมือที่ทำงานต่อเนื่องกันโดยเริ่มจาก

1. ขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างโปรตีน (Protein extraction and clean-up)

2. การหาปริมาณโปรตีน (2-D Quantification) วัดปริมาณที่ 480 nm

3. ทำการแยกโปรตีนในระนาบที่ 1 โดยใช้ Drystrip ซึ่งปัจจุบันมีขายหลายขนาดด้วยกัน ขึ้นกับการใช้งาน ลักษณะโปรตีนที่ต้องการศึกษา ยิ่ง strip ยาว ก็จะยิ่งแยกโปรตีนได้ชัดเจนขึ้น แต่ราคาก็สูงตามไปด้วย จากนั้นจึงแยกบนเครื่องแยก IEF ซึ่งจะทำการแยกโปรตีนตามประจุ pI ( First dimensional isoelectric focusing gel and First dimensional isoelectric focusing (IEF))

4. ทำการแยกโปรตีนในระนาบที่ 2 โดยใช้ SDS-PAGE ซึ่งขนาดของเจลก็ต้องสัมพันธ์กันกับขนาดของ strip จากนั้นจึงแยกโปรตีนตามขนาด MW ของชิ้นโปรตีน (Gel casting second dimension SDS-PAGE)

5. ย้อมสีโปรตีนในเจล ซึ่งนิยมใช้ Coomassie staining

6. ถ่ายภาพเจล เพื่อนำไปแปลผลกับโปรแกรม (Gels Scan)

7. ทำการแปลผล เปรียบเทียบความแตกต่างกันของโปรตีนในหลายๆ ชนิด (Images analysis)

เครื่องมือประเภทนี้ใช้ในการศึกษาทางด้าน Proteomics ค่ะ